规 格:90袋/盒(10份)
适用范围:广泛应用于食品、饮料饮用纯净水中的大肠菌群的检测。
检验方法:(参考GB 4789.3-2003)
① 样品处理:
以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体样品最好用均质器,以8000~10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液;用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,制成1:100的均匀稀释液;按上一步操作依次做10倍递增稀释液。
② 接 种:
根据食品卫生标准要求或对样本污染情况的估计,选择适宜稀释度的稀释液,吸取三份10
mL分别涂布于3袋大纸片;三份1
mL分别涂布于3袋小纸片;另取1
mL再稀释10倍后,吸取三份1
mL分别涂布于3袋小纸片。而后用手将检验纸片轻轻压平,袋口朝上竖直放置于恒温培养箱(35~37℃)内培养18~24h,然后观察结果。
③ 结果判断:
阴性结果:纸片保持紫蓝色不变,无论有否红色斑点或红晕均判为大肠菌群阴性。
阳性结果:纸片上呈现红色斑点或红晕,其周围变黄或整个纸片变黄均判为大肠菌群阳性。
④ 结果报告:
根据阳性反应的纸片数查相应的大肠菌群MPN表,得数据乘以稀释倍数,以此为结果,报告每100mL(g)检样内大肠菌群的MPN值(见附表)
注意事项:
1、
应避光低温(10℃以下)保存,并注意防潮,如发现纸片变为粉红色即为失效。
2﹑
检查食(饮)品时,凡酸性检样应以100g/L无菌碳酸钠溶液调pH至中性后,方可进行稀释接种。
3、 可疑结果的判断:
大肠菌群菌量的多少与结果的显示密切相关,可出现3种不同现象:(1)
菌量较大(≥103cfu/mL),整个纸片变黄而又无红色斑点(或红晕);(2)
菌量适中(102~103
cfu/mL),整个纸片也变黄,但有小而密集的红色斑点;(3)
菌量较少(≤102
cfu/mL),纸片可呈紫蓝色,并有散在或较密集的红色斑点,其周围变黄。因此菌量较大时,可能出现可疑现象。此时应通过加大样品稀释度或进一步做复发酵进行证实。其它可疑现象也可通过复发酵实验进行确认。
4 、 确认试验的方法:
进行确认试验,用灭菌摄子无菌操作将可疑纸片移种到乳糖发酵管里,置37
℃
24小时培养后,对其产酸产气者判为大肠菌群阳性,否则判为阴性。
附表:
大肠菌群最可能数(MPN)检索表(总接种量33.3ml,其中3份10ml水样,3份1ml水样,3份0.1ml水样)
阳性管数
|
MPN/
100ml
|
95%可信限
|
阳性管数
|
MPN/
100ml
|
95%可信限
|
10ml×3
|
1ml×3
|
0.1ml×3
|
下限
|
上限
|
10ml×3
|
1ml×3
|
0.1ml×3
|
下限
|
上限
|
0
0
0
0
|
0
0
0
0
|
0
1
2
3
|
<3
3
6
9
|
<0.5
|
9
|
0
0
0
0
|
1
1
1
1
|
0
1
2
3
|
3
6
9
12
|
<0.5
|
13
|
0
0
0
0
|
2
2
2
2
|
0
1
2
3
|
6
9
12
16
|
|
|
0
0
0
0
|
3
3
3
3
|
0
1
2
3
|
9
13
16
19
|
|
|
1
1
1
1
|
0
0
0
0
|
0
1
2
3
|
4
7
11
15
|
<0.5
1
|
20
21
|
1
1
1
1
|
1
1
1
1
|
0
1
2
3
|
7
11
15
19
|
1
3
|
23
36
|
1
1
1
1
|
2
2
2
2
|
0
1
2
3
|
11
15
20
24
|
3
|
36
|
1
1
1
1
|
3
3
3
3
|
0
1
2
3
|
16
20
24
29
|
|
|
2
2
2
2
|
0
0
0
0
|
0
1
2
3
|
9
14
20
26
|
1
3
|
36
37
|
2
2
2
2
|
1
1
1
1
|
0
1
2
3
|
15
20
27
34
|
3
7
|
44
89
|
2
2
2
2
|
2
2
2
2
|
0
1
2
3
|
21
28
35
42
|
4
10
|
47
150
|
2
2
2
2
|
3
3
3
3
|
0
1
2
3
|
29
36
44
53
|
|
|
3
3
3
3
|
0
0
0
0
|
0
1
2
3
|
23
39
64
95
|
4
7
15
|
120
130
380
|
3
3
3
3
|
1
1
1
1
|
0
1
2
3
|
43
75
120
160
|
7
14
30
|
210
230
380
|
3
3
3
3
|
2
2
2
2
|
0
1
2
3
|
93
150
210
290
|
15
30
35
|
380
440
470
|
3
3
3
3
|
3
3
3
3
|
0
1
2
3
|
240
460
1100
≥2400
|
36
71
150
|
1300
2400
4800
|
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